Enriquecimento de lipoproteínas bacterianas usando separação de fases de detergente não iônico

Tome um lisado bacteriano contendo proteínas hidrofílicas, lipoproteínas e agregados de proteínas.

Adicione um detergente frio e não iônico capaz de separação de fases em temperaturas mais quentes.

Incube no gelo e misture periodicamente. O detergente se liga à porção lipídica da lipoproteína, formando complexos proteína-detergente.

Aqueça a mistura para induzir a separação de fases. As lipoproteínas concentram-se na fase detergente, enquanto as proteínas hidrofílicas permanecem na fase aquosa.

Centrifugue à temperatura ambiente para manter a separação bifásica.

Descarte a fase aquosa, adicione um tampão frio à fase detergente e misture.

Repita o ciclo de resfriamento, aquecimento e centrifugação para enriquecer as lipoproteínas.

Em seguida, adicione tampão frio e centrifugue a baixa temperatura para granular os agregados não lipoproteicos.

Transferir o sobrenadante para um tubo contendo um solvente precipitante de proteínas e incubar a temperatura inferior a zero para precipitar as lipoproteínas.

Centrifugue à temperatura ambiente e descarte o sobrenadante.

As lipoproteínas precipitadas estão prontas para estudos a jusante.

Suplementar o sobrenadante com surfactante TX-114 até uma concentraç