Purificação de proteínas de domínio P recombinante derivadas de bactérias de norovírus humano

Pegue uma coluna de cromatografia de exclusão de tamanho repleta de esferas de gel esféricas porosas.

Equilibre a coluna com um tampão que preserve a integridade estrutural das proteínas durante a separação.

Carregue um extrato bacteriano purificado contendo proteínas do domínio P do norovírus humano expressas recombinantemente e impurezas proteicas residuais.

Adicione o buffer para conduzir a amostra pela coluna.

Grandes impurezas residuais não podem entrar nos poros e passar pelos espaços entre as contas, eluindo primeiro.

Monitore a eluição usando absorbância UV. Um pequeno pico indica impurezas saindo da coluna.

Em contraste, as pequenas proteínas do domínio P entram nos poros do grânulo, percorrem um caminho mais longo e eluem mais tarde. Um aumento no pico de absorbância indica a eluição das proteínas do domínio P.

Colete as frações eluídas contendo as proteínas do domínio P, que agora estão prontas para análise posterior.

Lave as bombas e tubos do sistema de purificação por cromatografia líquida de alto desempenho e pré-equilibre a coluna de cromatografia de exclusão de tamanho com tampão de filtração em gel. Injete o domínio P na coluna a uma taxa de fluxo de um mililitro por minut