Purificação seletiva de uma proteína bacteriana por cromatografia de troca iônica negativa

Comece com uma solução de resina de troca iônica contendo grupos funcionais carregados positivamente para ligação seletiva a proteínas.

Em seguida, pegue um extrato de proteína obtido de células bacterianas hospedeiras projetadas para superexpressar um fator de virulência da bactéria patogênica Helicobacter pylori.

O extrato contém o fator de virulência alvo junto com proteínas da célula hospedeira em um tampão em pH 8.

Misture o extrato de proteína com a resina e incube com agitação para garantir uma interação proteína-resina uniforme.

As proteínas do hospedeiro, com pontos isoelétricos inferiores ao pH do tampão, tornam-se carregadas negativamente e se ligam à resina carregada positivamente.

A proteína alvo, com um ponto isoelétrico próximo ao pH do tampão, permanece em grande parte sem carga e permanece sem ligação.

Transfira a pasta proteína-resina para uma coluna de cromatografia e deixe a resina assentar.

Recolha a fase líquida que contém a proteína-alvo não ligada.

Enxágue a resina com o tampão para garantir a recuperação máxima da proteína alvo.

Para preparar 15 mililitros de resina DEAE, suspenda 0,6 gramas de pó seco de resina DEAE em 30 mililitros de tampão Tris-HCl em temperatur