Um procedimento para a purificação de uma proteína marcada com poli-histidina de Streptococcus mutans

Pegue uma cultura de Streptococcus mutans expressando uma proteína marcada com poli-histidina secretada no meio.

Centrifugue a cultura e colete o sobrenadante rico em proteínas.

Adicione sulfato de amônio e incube com agitação para precipitar proteínas, reduzindo sua solubilidade.

Transfira a solução para um tubo, centrifugue e descarte o sobrenadante.

Ressuspenda o pellet em tampão de ligação contendo sais e baixo teor de imidazol para estabilizar a proteína.

Dialise a solução contra um tampão de ligação fresco para remover o excesso de sais.

Centrifugue a solução dialisada em detritos insolúveis em pellets e, em seguida, filtre o sobrenadante.

Misture o filtrado com resina de afinidade carregada de níquel e incube para permitir a ligação seletiva da proteína marcada com poli-histidina aos íons de níquel.

Colocar a mistura na coluna de cromatografia e lavar com tampão de ligação para remover as proteínas não ligadas.

Em seguida, adicione um tampão de eluição com alto teor de imidazol para deslocar a histidina dos íons de níquel e liberar a proteína marcada com poli-histidina.

Recolha este eluído contendo as proteínas purificadas.

Centrifugue a suspensão de cultura bacteriana por 20 minutos a