Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:09 min. • October 30th, 2025
Comece com uma cultura bacteriana e execute a diluição em série para reduzir a densidade celular.
Pegue uma pequena alíquota da diluição final e coloque-a em uma placa de ágar.
Adicione contas de vidro estéreis e agite suavemente a placa para garantir a separação espacial das células, o que é essencial para a obtenção de colônias bem isoladas.
Remova as contas de vidro, inverta a placa e incuba.
As células individuais proliferam e formam colônias separadas, gerando uma cultura monoclonal na qual cada colônia consiste em uma população bacteriana geneticamente uniforme.
Escolha colônias individuais e transfira-as para tubos separados contendo um meio líquido.
Incubar os tubos com agitação. Pós-incubação, avaliar a turbidez de cada cultura.
As células bacterianas suspensas no meio espalham a luz, fazendo com que as culturas pareçam mais turvas com o aumento da densidade celular.
Selecione o tubo com a maior turbidez, que indica a população bacteriana monoclonal mais densa, para aplicações a jusante.
Rotule as três garrafas preparadas com 100 mililitros de caldo LB Lennox com o número um, número dois e número três.
Pipete 0,1 mililitros da cultura bacteriana resultante no frasco um. Tampe o frasco e balance-o com a mão por um minuto para obter uma solução homogênea. Em seguida, pipete 0,1 mililitros do frasco número um para o frasco número dois. Novamente, tampe a garrafa e balance-a com a mão por um minuto. Execute a última diluição pipetando 0,1 mililitros da garrafa número dois para a garrafa número três. Tampe a garrafa e agite-a com a mão por um minuto.
Em seguida, pipete 20 microlitros da solução em cada uma das quatro placas de Petri. Em seguida, coloque quatro contas de vidro autoclavadas de três milímetros de diâmetro em cada uma das placas de Petri. Feche as tampas das placas de Petri e agite-as com a mão por um minuto.
Quando terminar, vire as placas de Petri de cabeça para baixo e incube as placas em uma incubadora a 37 graus Celsius por 24 horas.
Com uma espátula de aço inoxidável, retire as bactérias monoclonais resultantes das quatro placas de Petri e coloque-as nos sete tubos restantes contendo 12,5 mililitros de caldo LB Lennox. Deixe os tubos na incubadora de 37 graus Celsius por 24 horas e, em seguida, escolha aquele com maior dispersão de luz usando o método colorimétrico visual.