Produção e deposição à base de aerossóis de esporos de Bacillus subtilis

Comece com uma cultura de Bacillus subtilis, uma bactéria formadora de esporos altamente resistente.

Inocular a cultura num meio limitado em nutrientes e incubar com arejamento para induzir a esporulação.

As células esporulantes produzem esporos dormentes com camadas protetoras.

Transfira a cultura para um tubo e centrifugue para pellet os esporos. Remova o sobrenadante contendo as células residuais e detritos.

Lave o pellet com água destilada estéril, repita a centrifugação e ressuspenda os esporos em água estéril.

Usando um microscópio de contraste de fase, confirme a pureza dos esporos identificando esporos brilhantes e verificando a ausência de contaminantes.

Realize diluições em série dos esporos, placa em ágar nutriente e incube para permitir a germinação de esporos viáveis em colônias. Conte as colônias para determinar a concentração de esporos.

Com base nessa concentração, ajuste a quantidade de esporos e carregue a amostra diluída em um bico de aerossol. Pulverize-o sobre uma superfície de vidro estéril, onde a suspensão seca rapidamente para formar uma monocamada fina e uniforme de esporos.

Para realizar a produção de esporos, transfira uma cultura noturna de 5 mililitros da resp