Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:37 min. • October 30th, 2025
Faça uma cultura de Lactococcus lactis expressando a peptidase ligada à membrana NisP.
Misture a cultura com um meio rico em nutrientes.
Adicione o ágar derretido, misture e despeje em um prato para distribuir uniformemente L. lactis no ágar.
Depois de solidificado, perfure os poços no ágar.
Em seguida, pegue E. coli recombinante produzindo variantes precursoras de tipo selvagem ou modificadas do peptídeo antimicrobiano nisina.
Centrifugue para pellet as bactérias, descarte os sobrenadantes e ressuspenda os pellets em tampão.
Sonicar para lisar as bactérias, centrifugar e transferir os sobrenadantes para tubos novos.
Normalize os lisados para a mesma densidade óptica usando tampão para garantir níveis consistentes de peptídeos.
Pipetar cada amostra para alvéolos de ágar individuais e incubar as amostras.
Durante a incubação, os peptídeos precursores de nisina se difundem no ágar e são clivados por NisP, gerando nisina madura.
A nisina madura inibe o crescimento de L. lactis , formando halos claros ao redor do poço.
Compare os tamanhos do halo para avaliar a atividade antimicrobiana das variantes da nisina.
Adicione um mililitro da pré-cultura de Lactococcus lactis a 25 mililitros de caldo 2X M
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