Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:48 min. • October 30th, 2025
A fibrose cística (FC) é um distúrbio genético que causa acúmulo de muco espesso e pegajoso nos pulmões, formando escarro que suporta o crescimento microbiano patogênico.
Para preparar o escarro artificial da FC, tome soluções com propriedades bioquímicas importantes.
A mistura de mucina contém mucinas, que são glicoproteínas de alto peso molecular, para replicar a viscosidade do escarro da FC e promover a adesão microbiana.
A mistura química fornece íons e glicose para apoiar o metabolismo microbiano.
A mistura biológica fornece nutrientes para o crescimento microbiano.
Combine tudo para formar o meio de escarro artificial (ASM).
Adicione um agente tampão para manter um pH levemente ácido que favoreça a sobrevivência do patógeno.
Para esterilização média, transfira o ASM para uma câmara de filtração a vácuo com um filtro de membrana.
Filtre sob agitação para evitar a agregação de mucina e evitar o entupimento do filtro.
O vácuo puxa o meio através do filtro, removendo contaminantes microbianos e agregados macromoleculares.
O ASM está pronto para cultivar micróbios associados à FC.
Prepare um meio de escarro artificial adicionando 250 mililitros de ASCM ao frasco de 1 litro contendo ASMM. Em seguida, adicione 250 mililitros de ASBM ao frasco médio. Titular o meio com um tampão MOPS básico de 1 molar para atingir um pH de 6,3 em um papel de pH.
Refrigere o meio de escarro artificial a 4 graus Celsius até a filtração. Em seguida, para iniciar o processo de filtração, transfira 200 mililitros de meio de escarro artificial não filtrado para um sistema de filtragem a vácuo com um filtro de poro de 0,22 micrômetros. Depois de conectar o sistema de filtragem à bomba de vácuo, ligue a bomba de vácuo. Em seguida, coloque a câmara em um agitador orbital, agitando a 90 rotações por minuto em uma câmara fria a 4 graus Celsius.
Troque o filtro depois que 350 mililitros de meio forem filtrados para superar o problema de entupimento. Depois que uma quantidade considerável for filtrada, adicione um meio extra de 150 mililitros para filtração. Repita a filtração com câmaras adicionais até que todo o meio seja filtrado.