Quantificação de unidades formadoras de colônias de bactérias associadas ao intestino em moscas Drosophila

Comece com uma microplaca contendo homogeneizados preparados a partir de moscas Drosophila . Essas moscas abrigavam uma população controlada de uma bactéria específica em seu intestino.

Os homogeneizados contêm tecidos de mosca lisados e bactérias intestinais liberadas.

Aspire as bactérias suspensas e dilua em série em várias microplacas.

Localize pequenos volumes de cada diluição em placas de ágar, garantindo que as gotículas permaneçam separadas.

Incube para permitir que as bactérias proliferem em colônias visíveis.

Capture imagens das placas para quantificar as unidades formadoras de colônias (UFCs), que representam o número de células bacterianas viáveis capazes de formar colônias individuais.

Usando um software de análise de imagem, alinhe cada imagem usando uma linha de referência, defina um limite e aplique uma grade uniforme para segmentá-la em zonas de contagem, cada uma correspondendo a um único ponto.

Ajuste o limite de brilho para distinguir colônias individuais do plano de fundo e, em seguida, execute a análise para contar colônias em cada ponto e quantificar as UFCs.

Coloque três placas retangulares de crescimento de ágar MRS com as tampas abertas no gabinete de biossegurança