JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
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Comece com um extrato de levedura Todd-Hewitt estéril, ou placa de ágar THY, um meio rico em nutrientes que suporta o crescimento de Streptococcus mitis, uma bactéria patogênica.
Usando um laço estéril, risque a placa com a cepa bacteriana.
Coloque o prato inoculado em um frasco de vela, acenda uma vela, feche o frasco hermeticamente e incuba.
A vela acesa consome oxigênio e aumenta os níveis de dióxido de carbono, criando um ambiente microaerofílico que imita as condições do hospedeiro.
Os nutrientes no meio e o ambiente microaerofílico do frasco aumentam a proliferação bacteriana e promovem o desenvolvimento de um fenótipo de virulência.
Após a incubação, remova a tampa do frasco e recupere o prato.
Usando uma alça estéril, escolha uma única colônia isolada e transfira-a para um tubo cônico estéril contendo caldo THY.
Incube a cultura em condições estáticas para apoiar o crescimento bacteriano, preservando o fenótipo de virulência.
Esta cultura pode ser usada como um modelo patogênico para investigar as interações patógeno-hospedeiro.
Antes da preparação dos estreptococos do grupo Mitis, aqueça as placas de ágar THY em uma incubadora a 37 graus Celsius.
Depois disso, use uma alça estéril para riscar as cepas desejadas de Streptococci nas placas.
Em seguida, coloque os pratos em um frasco de vela e incube o frasco a 37 graus Celsius durante a noite por cerca de 18 horas para fornecer um ambiente microaerofílico.
No dia seguinte, remova os pratos do frasco de vela e use um laço estéril para colher colônias isoladas.
Inocule tubos cônicos estéreis de 15 mililitros contendo 2 mililitros de caldo THY.
Feche bem as tampas e incube os tubos a 37 graus Celsius em condições estáticas.