Coleta de fluido de lavagem broncoalveolar de um modelo de camundongo infectado com Haemophilus influenzae não tipável

Comece com um camundongo sacrificado com a traqueia exposta. Os pulmões do camundongo foram pré-infectados com Haemophilus influenzae não tipável, uma bactéria patogênica.

Insira um cateter na traqueia e conecte-o a uma seringa cheia de tampão de lavagem.

Administre o tampão de lavagem contendo um anticoagulante para evitar a formação de coágulos sanguíneos e um açúcar para preservar a integridade celular.

Aspire suavemente para recuperar o fluido de lavagem broncoalveolar contendo glóbulos vermelhos, células imunológicas e patógenos residuais.

Repita o procedimento e agrupe o fluido de lavagem recuperado em uma única suspensão.

Retirar uma alíquota da suspensão acumulada e centrifugar para separar as células. Descarte o sobrenadante.

Ressuspenda as células em um tampão de lise para lisar seletivamente os glóbulos vermelhos.

Centrifugar para separar as células restantes e rejeitar o sobrenadante que contém detritos.

Ressuspenda as células restantes em um buffer.

A suspensão final, contendo células imunes e bactérias residuais, está pronta para análise a jusante.

Exponha a parte ventral do pulmão para acessar a traqueia. Intubar a traqueia com um cateter de calibre 20.

Usando o cateter, instilar 0,8 mililitros de tampão BALF e coletar a lavagem por aspiração dentária. Repita este procedimento mais três vezes, agrupando as quatro coleções de lavagem em uma única suspensão.

Pegue uma alíquota de 100 microlitros e gire para baixo por dois minutos a 2.000 RPM.

Remova o sobrenadante e ressuspenda no tampão de lise de hemácias. Gire para baixo e ressuspenda o pellet com 1X PBS.