Síntese de antígenos proteicos de membrana estabilizados por nanodisco usando um sistema livre de células

Pegue um sistema livre de células bacterianas que não possui estruturas celulares intactas, mas retém os componentes moleculares necessários para a transcrição e tradução in vitro .

Introduzir plasmídeos que codificam o antígeno da proteína de membrana e a proteína do andaime, juntamente com fosfolipídios e polímeros sintéticos.

Complemente a mistura com ATP, GTP e uma mistura de aminoácidos para iniciar a síntese de proteínas.

Simultaneamente, prepare uma solução de ração enriquecida com a mistura de aminoácidos.

Carregue a mistura na câmara interna e a solução de alimentação na câmara externa de um dispositivo de diálise de compartimento duplo.

Durante a incubação, os substratos se difundem da câmara externa para a interna através da membrana semipermeável, facilitando a transcrição do plasmídeo e a tradução de proteínas.

A proteína de andaime monta os fosfolipídios e polímeros em nanodiscos lipídicos e facilita o dobramento e a incorporação de MPA nessas estruturas.

Os subprodutos gerados durante a reação se difundem na câmara externa, mantendo as condições ideais para a formação de MPA estabilizada por nanodiscos.

Prepare MOMP-tNLPs empregando um método sem células.

Descongele o tampão