Western Blot para avaliar a integridade estrutural de um antígeno de vacina bacteriana

Pegue um gel SDS-PAGE contendo bandas de proteínas de partículas de nanolipoproteína de membrana. Esses complexos carregam a proteína de membrana oligomérica de Chlamydia ou MP, um antígeno vacinal promissor contra a infecção por Chlamydia .

Use bandas de proteína de MP oligomérico purificado como controle.

Monte o gel, a membrana de western blot e os componentes de blotting em um sistema de blotting seco.

Aplique uma corrente elétrica para transferir as proteínas resolvidas para a membrana.

Remover a membrana e incubá-la num tampão contendo detergentes e anticorpos primários.

Os detergentes bloqueiam locais de interação não específicos, enquanto os anticorpos primários têm como alvo o MP.

Lave a membrana para remover anticorpos primários não ligados.

Incubar com anticorpos secundários conjugados com fluoróforo direcionados aos anticorpos primários.

Lave a membrana para remover o excesso de anticorpos secundários.

Capture imagens de fluorescência da membrana.

Bandas moleculares correspondentes ao MP oligomérico de controle confirmam a integridade estrutural do MP dentro dos complexos, apoiando seu potencial antigênico.

Resolva as amostras por SDS-PAGE e transfira as pilhas de gel usando um s