Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:54 min. • October 30th, 2025
Comece com uma cultura de cianobactérias, que são bactérias fotossintéticas.
Essas bactérias contêm gotículas de plastoglobulos ricas em lipídios e membranas tilacóides, que são estruturas membranosas dobradas ricas em pigmentos fotossintéticos.
Centrifugue a cultura e descarte o sobrenadante para remover os polissacarídeos extracelulares produzidos por bactérias. Lave o pellet e ressuspenda-o em um tampão.
Use um homogeneizador de alta pressão para gerar força de cisalhamento, que rompe as paredes e membranas celulares.
A ruptura das membranas do tilacóide libera pigmentos fotossintéticos no lisado. A liberação de pigmento causa uma mudança de cor que indica ruptura celular e liberação de plastoglobulos.
Carregue o lisado em tubos de centrífuga e, em seguida, adicione uma solução de sacarose para formar um gradiente de densidade.
Centrifugue para separar os componentes celulares por densidade.
O tilacóide e outros componentes mais pesados se aglomeram na parte inferior, enquanto os plastoglóbulos de baixa densidade flutuam para o topo como uma banda distinta.
Colete a fração de plastoglobulos e armazene-a por congelamento para análise posterior.
Cultive 50 mililitros de cultura PCC 6802 da
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