Interrupção mecânica de vermes individuais para avaliar a variabilidade nas interações hospedeiro-bactéria

Comece com vermes C. elegans adultos estéreis, recém-mortos e com cutículas permeabilizadas, suspensas em tampão.

Esses vermes estão infectados com bactérias em seus tratos intestinais.

Pegue uma placa de poço profundo contendo partículas abrasivas no tampão e transfira um único sem-fim para cada poço.

Cubra a placa com filme de vedação e uma tampa.

Incube a placa a uma temperatura baixa para evitar o superaquecimento durante a ruptura do tecido.

Pressione a tampa para selar os poços.

Usando um disruptor de tecido, agite mecanicamente a placa. As partículas abrasivas rompem os tecidos dos vermes, liberando bactérias intestinais.

Bata na placa e centrifugue-a para pellet o conteúdo.

Misture o conteúdo para distribuir uniformemente as bactérias e, em seguida, transfira-as para poços frescos.

Diluir em série a suspensão bacteriana em tampão.

Coloque as diluições em placas de ágar e incube para permitir a formação de colônias.

Conte as colônias para quantificar a variação nas cargas bacterianas intestinais entre vermes individuais.

Para se preparar para a interrupção mecânica de vermes, obtenha uma placa estéril de dois mililitros de profundidade de 96 poços e uma tampa de placa de silicone.

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