Quantificando a polaridade e a dinâmica de um componente do sistema de secreção em Legionella pneumophila

Comece com Legionella pneumophila, um patógeno respiratório que expressa um componente do sistema de secreção marcado com fluorescência necessário para a infecção do hospedeiro.

Para quantificar a polaridade desses componentes, adquira imagens de fluorescência e ajuste o contraste para distinguir células individuais.

Coloque regiões retangulares do pólo celular em direção ao citoplasma para medir os gradientes de fluorescência.

Mascare essas regiões para extrair a intensidade e a variância médias e, em seguida, calcule as pontuações de polaridade como taxas de variância para intensidade média.

Altos escores de polaridade indicam recrutamento direcionado de componentes nos pólos bacterianos.

Para medições dinâmicas, capture duas imagens de lapso de tempo e ajuste o contraste para visualizar as células com clareza.

Coloque regiões quadradas no centro da célula para medir a fluorescência citosólica.

Mascare células inteiras para corrigir o fotobranqueamento e defina regiões de fundo entre as células para subtração de ruído.

Exporte todas as intensidades e calcule a mudança na fluorescência ao longo do tempo.

O aumento da intensidade indica agrupamento, enquanto a diminuição da intensidade refl