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Microbiologia
0 vistas • 2:03 min • October 30th, 2025
Comece com uma cultura de Legionella pneumophila, uma bactéria patogênica.
Essas células bacterianas possuem um sistema de secreção em sua membrana, essencial para a infecção do hospedeiro.
Suspenda as células bacterianas em água estéril para atingir a densidade necessária para a tomografia eletrônica criogênica (crio-ET).
Adicione nanopartículas de ouro, que servem como pontos de referência para o alinhamento da imagem durante a reconstrução tridimensional.
Pegue uma grade com um filme de carbono perfurado para depositar a amostra bacteriana.
Coloque a grade dentro de uma câmara cheia de gás e aplique uma descarga elétrica para tornar a superfície mais hidrofílica.
Aplique a suspensão na grade, permitindo que o líquido se espalhe uniformemente na superfície e as células se assentem.
Remova o excesso de água da grade e mergulhe-a em um meio de congelamento líquido para congelar a amostra e preservar sua arquitetura celular.
A amostra agora está pronta para imagens crio-ET do sistema de secreção bacteriana.
Para preparar a amostra de criotomografia eletrônica, cultive uma mancha pesada de Legionella Pneumophila em placas CYE-ágar-estreptomicina por 48 horas a 37 graus Celsius.
Ressuspenda as células em água a um OD600 de cerca de 0,7. Em seguida, adicione cinco microlitros de partículas de ouro coloidal a 20 microlitros da suspensão celular. O brilho descarrega uma grade de carbono furada e pipeta cinco microlitros da mistura de células sobre ela.
Deixe repousar por um minuto. Seque a grade com papel de filtro e congele-a em etano líquido usando um aparelho de êmbolo acionado por gravidade.