Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 4:37 min. • October 30th, 2025
Pegue uma cultura de Phormidium lacuna, uma cianobactéria filamentosa.
Homogeneizar a cultura para dispersar os filamentos e, em seguida, centrifugar para pellet as bactérias.
Rejeitar o sobrenadante e ressuspender o sedimento em meios ricos em nutrientes.
Adicione DNA de plasmídeo contendo proteína fluorescente verde e genes de resistência a antibióticos em uma placa de ágar suplementada com antibióticos.
Adicione a suspensão bacteriana sobre o DNA e incube sob condições de luz.
As bactérias internalizam o DNA usando pili tipo IV. Os genes introduzidos se integram em uma das múltiplas cópias do genoma bacteriano.
Redistribua as bactérias em uma placa de ágar suplementada com antibióticos para selecionar as bactérias transformadas.
Sob um microscópio óptico, identifique filamentos verdes saudáveis indicando uma transformação bem-sucedida.
Transfira os filamentos selecionados para meios líquidos com maior concentração de antibióticos para enriquecer a população transformada.
Novamente, coloque-os em ágar com níveis mais altos de antibióticos para segregar os transformantes.
Visualize a expressão de GFP sob um microscópio de fluorescência para confirmar a transformação bem-sucedida.
Comece inoc
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