JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
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Comece com uma cultura de filamentos de Phormidium lacuna .
Homogeneizar brevemente a cultura para quebrar os aglomerados de filamentos e gerar uma suspensão uniforme.
Transferir a amostra homogeneizada para uma placa de Petri e deixá-la repousar.
Cubra o prato com celofane para reduzir a evaporação.
Coloque uma lâmina na platina do microscópio para servir como plataforma de suporte.
Posicione a placa que contém a amostra diretamente em cima da lâmina.
Use uma lente objetiva de baixa potência e concentre-se nos filamentos bacterianos suspensos no meio para observar seu movimento.
Os filamentos exibem um movimento lento e deslizante pela superfície, impulsionado por pili tipo IV - as fibras microscópicas montadas na membrana interna e emergindo através da membrana externa.
Essas fibras se estendem e se retraem para puxar as células para frente, permitindo que elas deslizem.
Este ensaio revela a motilidade deslizante característica de Phormidium lacuna em um ambiente líquido.
Cultive P. lacuna em meio F2 sob agitação horizontal de 50 RPM em luz branca por cerca de cinco dias até que a densidade óptica estimada em 750 nanômetros se torne 0,35. Armazene a amostra a quatro graus Celsius. Homogeneizar os filamentos com ultrassom por um minuto na potência máxima e ciclo de um.
Meça a densidade óptica em 750 nanômetros e transfira oito mililitros do meio contendo P. lacuna para uma placa de Petri de seis centímetros. Aguarde alguns minutos até que a amostra atinja a temperatura ambiente e, em seguida, cubra a placa de Petri com papel celofane. Coloque uma lâmina de microscópio na mesa XY de um microscópio padrão com uma câmera.
Ligue a luz do microscópio e mova uma objetiva de 4X ou 10X para o caminho da luz. Em seguida, coloque a placa de Petri em cima da lâmina. Ajuste filamentos individuais ou feixes de filamentos pelos movimentos X, Y e Z da tabela.
Observe os movimentos de filamentos individuais ou feixes e registre os movimentos com uma câmera de microscópio padrão. Certifique-se de que a lente objetiva não toque no líquido.