Ensaio fluorescente de alta capacidade para estudar interações microrganismo-verme

Comece com um tubo contendo vermes C. elegans .

Transfira as minhocas para uma placa multipoço com meio de agarose rico em nutrientes, contendo tanto a bactéria controle quanto a bactéria testada.

Durante a incubação, os vermes ingerem bactérias, que colonizam o epitélio intestinal e liberam aminoácidos que servem como fonte de nutrientes. Esses aminoácidos são metabolizados em derivados de aminoácidos e armazenados em grânulos intestinais relacionados aos lisossômicos.

Em seguida, adicione um novo tampão e transfira as minhocas para uma placa preta de ensaio multipoço.

Adicione um indutor químico de estresse a cada poço e fele a placa.

Coloque a placa em um leitor de placas de fluorescência e registre a fluorescência.

Em vermes, o indutor de estresse causa estresse oxidativo, que danifica as células epiteliais intestinais.

Isso faz com que os grânulos intestinais relacionados aos lisossomos se rompam, liberando derivados de aminoácidos que, ao serem expostos à luz ultravioleta, fluorescem azul.

Compare a fluorescência de vermes expostos ao controle e teste bactérias para avaliar a eficiência da colonização bacteriana e seu impacto na resposta ao estresse oxidativo do hospedeiro.

Ajuste a c