Preparação de uma Placa Microfluídica com Células Bacterianas

Pegue uma placa microfluídica contendo pares de poços de entrada e saída conectados por canais microfluídicos, que incluem canais serpentinos e um canal experimental.

Para preparar os canais, adicione mídia bem à saída.

Coloque a placa em uma etapa de placas e fele com uma tampa esterilizada.

Ative o fluxo de mídia do poço de saída para o poço de entrada para eliminar quaisquer bolsas de ar presas dentro dos canais.

Remova a placa. Descarte o meio residual do poço de saída e adicione uma cultura bacteriana.

No poço de entrada, adicione meio novo para evitar o retorno de ar. Coloque a placa de volta no palco.

Enquanto observa ao microscópio, retome o fluxo para atrair células para o canal experimental.

Ajuste a taxa de fluxo para evitar a entrada de células nos canais serpentinos e evitar entupimento do corpo.

Interrompa o fluxo e incube para facilitar a ligação bacteriana.

Remova a placa e descarte a cultura bacteriana residual e o meio.

As bactérias dentro da placa microfluídica agora estão prontas para novos experimentos.

Para o primer inicial, primeiro remova a placa microfluídica de 48 poços da embalagem, sem tocar a superfície do vidro na parte inferior da placa, e limpe a lâmina de vidro na parte inferior da placa com um papel de lente. Para preparar os canais microfluídicos, pipete 200 microlitros a 37 graus Celsius com meio mínimo no poço de saída, tomando cuidado para evitar bolhas. Depois, coloque a placa na etapa da placa.

Limpe a interface com etanol, selando-a na plataforma de placas assim que o etanol secar. No modo manual no módulo de controle, ajuste o fluido como caldo Luria-Bertani a 37 graus Celsius, e o corte máximo como cinco dyne por centímetro quadrado. Clique nos poços de saída para ativar o fluxo da saída para o poço de entrada, para preparar os canais.

Após cinco minutos, pause o fluxo para preparar a semeadura e remova cuidadosamente a placa do palco. Depois, aspire qualquer meio residual do poço de saída sem remover nenhum meio do círculo interno que conduz aos canais microfluídicos. Para semear os canais experimentais, adicione 300 microlitros de meio mínimo no poço de entrada, seguido pela adição de 300 microlitros de cultura bacteriana no poço de saída.

Retorne a placa à fase de imagem, certificando-se de limpar a interface com etanol antes de colocá-la na placa, e use o feed ao vivo da câmera para focar em um único canal. Durante o monitoramento visual da transmissão ao vivo, retome o fluxo em 1 a 2 dyne por centímetro quadrado por aproximadamente 2 a 4 segundos, para permitir que as células entrem no canal experimental, mas não nos canais serpentinos, e deixe a placa no estágio de controle de temperatura por uma hora, permitindo a fixação das células. Ao final do período de fixação, remova cuidadosamente a placa do estágio e aspire as bactérias do poço de saída sem perturbar o canal.

Depois, use uma nova ponta de pipeta para remover o meio dos poços de entrada.