Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:52 min. • November 28th, 2025
Pegue uma microplaca cheia de um meio nutritivo contendo manitol.
Inocule cada poço com uma bactéria produtora de celulose e incube em condições estáticas.
Durante a incubação, as bactérias absorvem manitol e o metabolizam em glicose.
Essa glicose é transportada para complexos de celulose sintase embutidos na membrana bacteriana e polimeriza em cadeias de glucano.
Essas cadeias extrudem para o espaço extracelular, onde cristalizam em microfibrilas.
As microfibrilas se agrupam em estruturas semelhantes a fitas, formando uma matriz de nanocelulose tridimensional.
À medida que mais nanocelulose é produzida, ela se acumula na interface ar-líquido, espessando em películos gelatinosos moldados na forma do poço.
Colhe as películas e incube-as em uma solução alcalina para lisar as células bacterianas, depois remova o meio residual.
Enxágue as películas repetidamente com água para eliminar qualquer solução alcalina restante. Armazene as películas na água para evitar a desidratação. Depois, esterilize-as a vapor para garantir a esterilidade para aplicações futuras.
Transfira dois mililitros do meio de cultura líquida para cada poço de uma placa de cultura de tecido de 24 poços. Pegue duas colônias com uma agulha inoculadora das placas de Petri inoculadas em passo e coloque-as no primeiro poço da placa de cultura de tecidos. Repita o mesmo procedimento para os 23 poços restantes.
Incube a placa de cultura de tecido a 30 graus Celsius por sete dias. Isso resultará em um total de 24 filmes BNC com diâmetro de 16 mm e espessura de aproximadamente 2 a 3 mm. Pegue as películas BNC do meio de crescimento e esterilize-as em 200 mililitros de solução de hidróxido de sódio a um por cento por uma hora a 50 graus Celsius para remover todos os vestígios de G. xylinus.
Descarte a solução e adicione 200 mililitros de solução recém-preparada de hidróxido de sódio de um por cento. Repita o mesmo processo mais uma vez ou até que as películas BNC em solução adquiram uma aparência translúcida. Enxágue as películas BNC com água três vezes e armazene-as em água de alta pureza em temperatura ambiente.
Certifique-se de que as películas do BNC estejam completamente submersas na água e não possam secar em nenhum momento. Depois, autoclave as películas do BNC a 121 graus Celsius por 20 minutos.