Isolamento de Endosporos de uma Amostra Ambiental por Lise Direcionada de Células Vegetativas

Colete uma amostra ambiental contendo células vegetativas e endosporos de uma bactéria formadora de endosporos, junto com outras bactérias.

Os endosporos possuem uma camada protetora que os ajuda a sobreviver em condições adversas.

Usando uma unidade de filtragem a vácuo, filtre a amostra para prender as células e os endosporos em uma membrana.

Coloque a membrana em um recipiente e corte em pedaços pequenos.

Transfira as peças para um tubo, adicione um tampão e agite o tubo para liberar as células e os endosporos.

Incubar com agitação em alta temperatura para enfraquecer as estruturas celulares vegetativas sem prejudicar os endosporos.

Resfrie a amostra, depois adicione a lisozima e incube com agitação. A lisozima rompe a parede celular das células vegetativas, causando sua ruptura.

Adicione hidróxido de sódio e um detergente, e incube para degradar as macromoléculas celulares e os detritos, preservando os endosporos resilientes.

Filtre a amostra para isolar os endosporos. Lave os endosporos para remover o excesso de reagentes, preparando-os para análises posteriores.

Uma vez que a unidade de filtragem e a bomba de vácuo estejam preparadas conforme o protocolo de texto, utilize pinças ester