Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 1:59 min. • November 28th, 2025
Comece com culturas noturnas de cepas de Vibrio cholerae , bactérias patogênicas cultivadas em meio rico em nutrientes.
Centrifuge as culturas para pelletar as células. Remova o sobrenadante contendo compostos extracelulares e ressuspenda o pellet em soro.
Em seguida, mergulhe um inoculador estéril por fio na cultura e espete-o verticalmente no ágar de motilidade para depositar as bactérias abaixo da superfície sem espalhamento lateral.
Esterilize o inoculador com chama entre cada cepa para evitar contaminação cruzada.
Incube a placa para permitir que as bactérias migrem pelo ágar de motilidade.
O ágar contém cloreto de trifeniltetrazólio, ou TTC, um indicador redox que fica vermelho após a redução por células metabolicamente ativas.
Cepas móveis reduzem a TTC em uma ampla área, formando uma grande zona vermelha, enquanto cepas não móveis apresentam coloração confinada à linha de estalamento.
O tamanho e a dispersão das zonas vermelhas indicam a motilidade de cada cepa.
Lave a célula obtida da cultura durante a noite. Inocule as placas de ágar de motilidade inserindo uma punhalada inoculante na cultura líquida lavada e espete verticalmente no meio.
Certifique-se de que a punhalada inoculadora não dobre ao esfaquear o ágar. Entre cada inoculação, esterilize a punhalada de arame usando um bico Bunsen. Incube as placas com a tampa para cima por 14 a 24 horas a 37 graus Celsius.
Após 14 horas, monitore cuidadosamente as placas de motilidade para evitar o crescimento excessivo de culturas.