Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:27 min. • November 28th, 2025
Considere culturas separadas de Vibrio cholerae, uma bactéria patogênica contendo três biótipos diferentes: a clássica, a variante selvagem El Tor e a variante El Tor, cada uma representando subgrupos geneticamente distintos.
Inocule cada cultura em tubos preenchidos com um meio especializado para realizar o ensaio Voges-Proskauer (VP).
Incube com sacudição para facilitar a proliferação bacteriana.
O tipo selvagem El Tor fermenta glicose no meio e produz acetoína, enquanto os biótipos clássicos e variantes não o fazem.
Em seguida, adicione α-naftol e hidróxido de potássio em cada tubo, misture bem e incube.
Na presença de hidróxido de potássio, o oxigênio atmosférico catalisa a oxidação da acetoína para diacetil.
O diacetil reage com compostos contendo grupos guanidina no meio para formar um produto de cor rosada-avermelhada, cuja intensidade é aumentada pelo α-naftol.
O desenvolvimento da cor indica uma reação positiva de VP, característica do tipo selvagem de El Tor, enquanto os biótipos clássicos e variantes não apresentam formação de cor.
Inocule 4 mililitros de caldo Voges-Proskauer ou MR-VP Metil-Red pipetando 10 microlitros de cultura previamente preparada durante a noite em 4 mililitros de caldo MR-VP em um tubo de cultura estéril e incube com aeração em incubadora shaker a 225 rpm por 12-16 horas a 37 graus Celsius. Em seguida, adicione 150 microlitros de 5% de peso por volume de Alfa-naftol e 50 microlitros de hidróxido de potássio de 40% por volume a 1 mililitro de alíquotas da cultura noturna de MR-VP em tubos de cultura estéreis, respectivamente.
Depois, faça um vórtice breve nos tubos. Deixe os tubos em temperatura ambiente por até quatro horas até que a cor se mude.