Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:48 min. • November 28th, 2025
Pegue uma mistura mestre contendo uma DNA polimerase deslocante de fias, nucleotídeos e um corante de ligação ao DNA de fita dupla para amplificação isotérmica mediada por laço, ou LAMP.
Adicione primers que contenham uma sequência reversa-complementar específica para o gene bacteriano alvo.
Distribua a mistura master nos tubos.
Adicione amostras contendo moldes de DNA bacteriano aos tubos.
Coloque os tubos dentro de um instrumento LAMP.
A desnaturação inicial permite que o primer se ligue ao DNA-alvo.
À medida que a DNA polimerase deslocadora começa a sintetizar uma nova fita, ela desloca a fita existente, eliminando a necessidade de ciclo térmico.
O produto amplificado forma uma estrutura em loop devido ao emparelhamento reverso-complementar.
Essa estrutura contém múltiplos locais de início para o próximo ciclo, facilitando a amplificação exponencial do DNA-alvo.
O corante se liga ao DNA amplificado e emite fluorescência.
Monitore a fluorescência em tempo real para detectar a presença do gene bacteriano alvo nas amostras.
Separe fisicamente as áreas usadas para preparar a mistura LAMP Master e adicionar os moldes de DNA.
Limpe as superfícies de trabalho com isopropanol e uma solução degradan
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