Entrega por eletroporação de biomoléculas fluorescentes em células bacterianas

Comece com uma cuveta refrigerada contendo uma suspensão de células bacterianas eletrocompetentes, que apresentam maior suscetibilidade à permeabilização membranar.

A suspensão também contém biomoléculas marcadas com fluoróforos orgânicos.

Aplique um pulso elétrico de alta voltagem para criar poros temporários na membrana, permitindo a entrada da biomolécula no citoplasma.

Adicione um meio rico em nutrientes e transfira as células para um tubo. Incubar para promover a reparação da membrana.

Centrifuge as células e descarte o sobrenadante contendo biomoléculas não internalizadas.

Resuspenda as células em um tampão rico em sal contendo um detergente para desprender as biomoléculas aderidas à superfície.

Centrifuge novamente, descarte o sobrenadante e ressuspenda as células no buffer.

Transfira a suspensão para um filtro e centrífuga para descartar o fluxo que contenha quaisquer biomoléculas não internalizadas. Depois, enxágue as células com um novo tampão e as ressuspenda.

Monte as células em uma base de agarose e coloque uma cobertura de cobertura. As bactérias marcadas fluorescente estão prontas para visualização.

Começando com um estoque de biomoléculas fluorescentes preparadas em um tampã