Análise precisa e de alta capacidade do crescimento bacteriano usando um leitor de microplacas

Comece com bactérias preservadas em um estoque de glicerol, previamente crescidas até a fase exponencial inicial para garantir estados fisiológicos uniformes e crescimento reprodutível.

Adicione meio de crescimento e vórtice para ressuspender uniformemente as bactérias.

Dilua serialmente a suspensão usando meio fresco para obter uma faixa de densidades celulares iniciais.

Carregue as amostras nos poços internos de uma placa multipoço, deixando os poços de borda preenchidos com meios em branco para minimizar a variabilidade relacionada à evaporação.

Coloque a placa em um leitor de microplacas para manter o tremor constante e uma temperatura ideal para o crescimento bacteriano.

À medida que as bactérias se multiplicam, a densidade óptica ou OD da cultura aumenta.

Meça o OD em intervalos fixos.

Subtraia os valores iniciais de OD obtidos dos poços em branco para corrigir a absorção de fundo.

Depois, calcule a taxa de crescimento a partir de valores consecutivos de OD medidos em intervalos de tempo definidos, permitindo uma quantificação precisa e de alta produtividade da dinâmica do crescimento bacteriano.

Para registrar o crescimento em tempo real, adicione aproximadamente 25 mililitros de M63