Avaliação do Papel Protetor de uma Chaperona Ativada por Ácido em E. coli sob E. Coli sob Estresse Ácido

Veja culturas recombinantes de E. coli sensíveis ao estresse ambiental.

A cultura de teste carrega um plasmídeo codificando uma chaperona ativada por ácido, enquanto a cultura controle carrega apenas a espinha dorsal do plasmídeo.

Inocular colônias individuais em meios suplementados com antibióticos para garantir a retenção de plasmídeos e incubar para promover o crescimento bacteriano.

Dilua as culturas em meio fresco contendo o antibiótico e um indutor para ativar a expressão de chaperonas.

Cultive as culturas até a fase média logaritaritharitma e depois dilua para alcançar uma densidade óptica específica.

Adicione ácido para baixar o pH, induzindo estresse ácido.

Na cultura testada, condições ácidas ativam a chaperona, que estabiliza as proteínas celulares e impede sua agregação. Na cultura controle, a ausência do chaperone faz com que as proteínas celulares se desnaturalizem e se agreguem.

Adicione uma base para neutralizar o pH e parar o estresse ácido.

Monitore o crescimento bacteriano medindo a densidade óptica ao longo do tempo.

O aumento do crescimento na cultura testada indica o papel protetor do acompanhante durante o estresse ácido.

Prepare uma cultura durante a noite em 50 milil