Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:54 min. • November 28th, 2025
Comece com um tubo contendo uma comunidade bacteriana sintética comumente encontrada na boca humana.
Adicione fluido salivar simulado contendo mucina, uma glicoproteína e a enzima α-amilase para imitar o ambiente oral, e então incube com agitação.
As bactérias interagem com a mucina, que promove a agregação, enquanto a α-amilase replica as condições enzimáticas da saliva.
Colha uma amostra.
Em seguida, introduza líquido gástrico simulado com mucina em pH ácido para imitar o ambiente estomacal, e incube com tremores.
As condições ácidas matam espécies bacterianas sensíveis ao ácido, mas espécies bacterianas tolerantes ao ácido e revestidas por mucina e levemente tolerantes a ácido sobrevivem.
Pegue outra amostra.
Por fim, adicione fluido intestinal simulado contendo bicarbonato e sais fisiológicos. Incube com sacudimento.
O ambiente rico em sal induz estresse iônico, que desregula a membrana bacteriana e reduz a viabilidade.
Colete uma amostra final.
Todas as três amostras pós-simulação estão agora prontas para avaliação da viabilidade bacteriana.
Para simular a digestão oral, transfira 3 mililitros da comunidade bacteriana em um tubo estéril de 50 mililitros e misture com 3 mililitros de fluido salival simulado ou SSF.
Adicione 75 unidades por mililitro de alfa-amilase da saliva humana tipo 9A e dois gramas por litro de mucina do estômago suíno tipo 2. Incube a mistura a 37 graus Celsius e 100 RPM por dois minutos. Colete uma amostra de 2 mililitros para extração de DNA e quantificação por citometria de fluxo.
Para simular a digestão gástrica, adicione 4 mililitros de líquido gástrico simulado ou SGF a 3 mililitros da bactéria. Use um molar de HCl para ajustar o pH para 3, se necessário. Incube a amostra a 37 graus Celsius e 100 RPM por dois minutos.
Depois, colete uma amostra de 2 mililitros. Para digestões do intestino delgado, adicione 4 mililitros de fluido intestinal simulado ou SIF à bactéria. Use hidróxido de sódio para ajustar o pH, se necessário.
Depois, incube a amostra a 37 graus Celsius e 100 RPM por dois minutos e colete uma amostra de 2 mililitros.