Ensaio de sobreposição de ágar macio para detectar morte mediada por bacteriocina em Pseudomonas syringae

Comece com um ágar macio derretido mantido em temperatura quente.

Inocule uma cultura de Pseudomonas syringae , a cepa teste, no ágar.

Depois, faça um vórtice breve para distribuir as células de forma uniforme.

Despeje a mistura sobre uma placa de ágar solidificada e espalhe uniformemente.

Feche a tampa e deixe solidificar.

Avistar um sobrenadante filtrado na superfície do ágar solidificado.

O sobrenadante contém bacteriocina, uma molécula antibacteriana derivada de uma cepa doadora induzida por estresse, P. syringae .

Incube a placa para permitir o crescimento bacteriano e a difusão da bacteriocina através do ágar.

A bacteriocina se liga a receptores específicos da superfície da cepa testada e desintegra sua membrana, levando à morte celular.

Isso resulta na formação de uma zona clara no ágar, indicando a área onde a cepa de teste foi eliminada pela molécula antibacteriana bacteriocina.

Dilua a cultura de 1 a 100 KB frescos. Incube a cultura por três a quatro horas com agitação em temperatura ambiente. Em seguida, prepare ágar aquático esterilizado autoclavando uma suspensão de ágar em água ultrapura.

Mantenha o ágar mole derretido em um banho-maria a 60 graus Celsius antes do uso. Utilizand