JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:18 min • November 28th, 2025
Pegue uma cultura bacteriana que tenha sido cultivada sob condição de estresse por um período prolongado.
O estresse de longo prazo resulta em mutações espontâneas, seleção natural e proliferação de bactérias adaptadas ao estresse.
Para isolar essas bactérias, coloque um pequeno volume da cultura em uma placa de ágar contendo o mesmo estressor e incube.
O estressor garante o crescimento apenas de colônias bacterianas adaptadas ao estresse.
Escolha uma única colônia para manter a pureza genética e inocule o meio líquido com o estressor.
Incube com tremores para facilitar o crescimento de bactérias adaptadas ao estresse.
Use um pequeno volume da cultura para inocular o substrato fresco com o estressor.
Simultaneamente, inocule outro meio contendo o estressor com bactérias do tipo selvagem ou não adaptadas ao estresse.
Meça a absorção em intervalos regulares como indicador do crescimento bacteriano.
Compare o perfil de crescimento para garantir o isolamento bem-sucedido das bactérias adaptadas ao estresse.
Prepare um meio de placa de ágar a 1,6% contendo o mesmo estressor na mesma concentração do meio. Retire 0,1 mililitros da cultura de saída do quimostato e incube a 37 graus Celsius por 16 horas. Após a incubação, retire-se colônias individuais da placa usando um palito de dente estéril e inocule-as em tubos de ensaio de 15 mililitros contendo o mesmo estressor e na mesma concentração média do quimostato.
Incube por seis horas. Transfira um mililitro do caldo de cultura para um frasco Erlenmeyer de 250 mililitros contendo 50 mililitros de meio. Colhe 0,5 mililitros do caldo de cultura a cada hora e meça a densidade óptica em 600 nanômetros.
Compare a taxa de crescimento da deformação adaptada com a da deformação do tipo selvagem, dado o fator de estresse