Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:07 min. • November 28th, 2025
Comece com uma amostra de água do mar contendo diversas comunidades microbianas, incluindo bactérias capazes de degradar hidrocarbonetos.
Realize diluições seriadas da amostra em soro fisiológico para reduzir a densidade microbiana.
Adicione o petróleo bruto à água destilada estéril e agite a mistura para solubilizar parcialmente os componentes hidrocarbonetos do óleo.
Deixe a mistura assentar, separando-a em frações de óleo solúveis em água e insolúveis em água.
Prepare placas seletivas de ágar usando cada fração de óleo como única fonte de carbono para enriquecer bactérias que degradam hidrocarbonetos solúveis ou hidrofóbicos.
Coloque as amostras de água do mar diluídas no meio seletivo e incube na temperatura ambiente.
Colônias que emergem dependem de enzimas como hidroxilases e dioxigenases para metabolizar hidrocarbonetos.
Escolha colônias morfologicamente distintas e recoloque em meios frescos contendo a mesma fração de óleo para obter culturas puras de bactérias degradadoras de hidrocarbonetos.
Esse método permite o isolamento seletivo de bactérias marinhas degradadoras de óleo.
Para preparar um meio mínimo contendo fração solúvel em óleo e água e fração insolúvel em óleo e água como única fonte de carbono, adicione 1-2% de petróleo bruto a 500 mililitros de água destilada estéril em um frasco filtrante contendo uma válvula no fundo. Mantenha o frasco sob agitação constante entre 24 e 28 graus Celsius a 150 vezes g por 48 horas. Depois disso, coloque o frasco em uma superfície estável e espere de 10 a 20 minutos para permitir que a fração solúvel e insolúvel se separem.
Depois, abra o filtro inferior para transferir a fração solúvel em óleo e água para um novo frasco estéril, salvando a fração insolúvel óleo-água. Depois, prepare duas garrafas de médio de ágar mínimo Bushnell Haas. Autoclave isso.
Combine com a fração solúvel em óleo e água como única fonte de carbono para produzir 500 mililitros de meio de ágar. Faça o mesmo com a fração insolúvel de óleo e água e transfira aproximadamente 25 mililitros de cada meio para placas de Petri individuais. Para isolar bactérias degradadoras de óleo, reutilize amostras previamente diluídas e pipete 100 microlitros de cada diluição nas placas de Petri contendo meio de ágar e as place.
Lembre-se de manter controles negativos para suas placas. Incube os pratos por um a três dias na temperatura de-alvo e repita os procedimentos de isolamento como antes.