Monitorando o crescimento bacteriano em resolução de célula única em um sistema microfluídico

Comece com um dispositivo microfluídico montado no palco de um microscópio de fluorescência invertida.

O dispositivo consiste em um chip de polímero com canais horizontais de alimentação. Cada canal é revestido por uma série de trincheiras estreitas seladas em uma extremidade e projetadas para confinar células bacterianas em cadeias lineares.

Dentro das trincheiras existem células bacterianas não móveis que expressam uma proteína fluorescente, permitindo sua visualização.

Cada canal de alimentação é conectado a bombas de seringa que fornecem um meio rico em nutrientes com uma vazão controlada.

Inicie o fluxo para permitir que o meio se difunda nas trincheiras e suporte o crescimento bacteriano.

Células bacterianas confinadas se dividem dentro da trincheira, formando uma cadeia de descendentes.

O design da trincheira garante que as células mais novas na extremidade aberta sejam lavadas, permitindo o rastreamento a longo prazo das células mais antigas.

Capture imagens de trincheiras ao longo do tempo para acompanhar o crescimento e a divisão de células bacterianas individuais.

Monte cuidadosamente o dispositivo carregado em um inserto de palco, colando o vidro da capa de cada lado do PDMS na