Transfecção de um sistema de expressão gênica induzível em células que expressam uma proteína efetora bacteriana
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:43 min. • November 28th, 2025
Teste células humanas que expressam CaeB, uma proteína bacteriana antiapoptótica.
Use células que não tenham CaeB como controle.
Introduza um reagente de transfecção complexo com um sistema de expressão gênica induzível por tetraciclina, contendo plasmídeos reguladores e de resposta.
O plasmídeo regulador codifica um ativador e silenciador transcricional, enquanto o plasmídeo de resposta codifica uma proteína pró-apoptótica controlada por TRE.
Incubar as células para facilitar a absorção de plasmídeos e a expressão reguladora de proteínas.
Sem tetraciclina, o ativador permanece inativo, e o silenciador reprime a transcrição conduzida por TRE.
Adicione um análogo de tetraciclina e incube.
O análogo permite a ligação ativador–TRO, iniciando a expressão proteica pro-apoptótica.
Nas células de controle, isso desencadeia sinalização apoptótica, ativando um marcador apoptótico.
Em células que expressam CaeB, CaeB inibe a sinalização apoptótica, reduzindo a ativação do marcador.
Uma ativação reduzida dos marcadores em células que expressam CaeB sugere que CaeB inibe a apoptose.
Comece esse procedimento semeando células HEK293 que expressam GFP ou GFP-CaeB de forma estável em uma placa de 12 poços co
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