Monitoramento Contínuo do Ruído Biológico em Bactérias Usando Microscopia de Time-Lapse

Comece com uma placa de cultura contendo bactérias embutidas sob uma almofada de gel de agarose para imobilizar as bactérias e apoiar o crescimento de uma monocamada.

As bactérias expressam constitutivamente a proteína fluorescente verde, permitindo o monitoramento em tempo real da expressão gênica.

Despeje gel adicional de agarose ao redor da amostra para selar a amostra e deixe-a solidificar em temperatura ambiente.

Sele a placa com fita, perfure-a para permitir a troca de gases e inverta-a para evitar condensação.

Incube a placa em baixa temperatura para estabilizar o gel e evitar a divisão bacteriana.

Em seguida, aplique óleo de imersão no objetivo e coloque a placa sobre um palco de microscópio confocal.

Inicie a imagem em time-lapse.

À medida que a GFP amadurece gradualmente, ela começa a fluorescer. Durante a divisão celular, essas proteínas fluorescentes são distribuídas entre as células-filhas, causando uma queda na intensidade da fluorescência.

Isso cria um padrão de fluorescência em forma de serra, e diferenças nesse padrão entre células geneticamente idênticas no mesmo ambiente mostram ruído biológico na expressão gênica.

Para capturar as amostras, retire o frasco da água e deix