Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:12 min. • November 28th, 2025
Comece com um tubo colocado dentro de uma câmara anaeróbica que contenha um meio rico em nutrientes e uma fibra fermentável pré-hidratada.
As condições de privação de oxigênio dentro do tubo imitam o ambiente anaeróbico do cólon humano.
Em seguida, adicione uma amostra de fezes diluída e homogeneizada contendo microrganismos intestinais ao tubo e incube-a.
Inverta regularmente o tubo para misturar os microrganismos com a fibra.
Durante a incubação, os microrganismos metabolizam e fermentam a fibra anaeróbica, produzindo ácidos graxos de cadeia curta e outros metabólitos, reduzindo o pH do meio.
Colete alíquotas da mistura fermentada em intervalos regulares para monitorar a produção de metabólitos e verificar seu pH.
Centrifuge as aliquotas em baixas temperaturas para separar a biomassa microbiana em um pellet.
Transfira o sobrenadante contendo os metabólitos e ácidos graxos de cadeia curta para um tubo fresco.
Congele tanto a biomassa microbiana quanto o sobrenadante em nitrogênio líquido.
Por fim, armazene as amostras em baixa temperatura para análise posterior.
Mantenha os tubos inoculados a 37 graus Celsius dentro da câmara anaeróbia e inverta suavemente uma vez a cada hora para ressuspender as fibras e o inóculo. Após 3, 6, 9 ou 24 horas, retire a quantidade adequada de meio fermentado e centrifuge as amostras a 14.000 vezes g por 10 minutos a quatro graus Celsius.
Congele imediatamente o sobrenadante e o pellet em nitrogênio líquido e, após o congelamento rápido, armazene o sobrenadante para análise de ácidos graxos de cadeia curta e o pellet para análise do microbioma, a menos 80 graus Celsius.