In vitro Modelo de Cultura em Lote para Imitar a Fermentação Cólica pela Microbiota Intestinal Humana

Comece com um tubo colocado dentro de uma câmara anaeróbica que contenha um meio rico em nutrientes e uma fibra fermentável pré-hidratada.

As condições de privação de oxigênio dentro do tubo imitam o ambiente anaeróbico do cólon humano.

Em seguida, adicione uma amostra de fezes diluída e homogeneizada contendo microrganismos intestinais ao tubo e incube-a.

Inverta regularmente o tubo para misturar os microrganismos com a fibra.

Durante a incubação, os microrganismos metabolizam e fermentam a fibra anaeróbica, produzindo ácidos graxos de cadeia curta e outros metabólitos, reduzindo o pH do meio.

Colete alíquotas da mistura fermentada em intervalos regulares para monitorar a produção de metabólitos e verificar seu pH.

Centrifuge as aliquotas em baixas temperaturas para separar a biomassa microbiana em um pellet.

Transfira o sobrenadante contendo os metabólitos e ácidos graxos de cadeia curta para um tubo fresco.

Congele tanto a biomassa microbiana quanto o sobrenadante em nitrogênio líquido.

Por fim, armazene as amostras em baixa temperatura para análise posterior.

Mantenha os tubos inoculados a 37 graus Celsius dentro da câmara anaeróbia e inverta suavemente uma vez a cada hora para ressuspen