Uma abordagem baseada em Cromatografia Líquida e Espectrometria de Massas para Análise de Metabólitos de S. aureus

Comece com Staphylococcus aureus suspenso em uma solução de têmpera contendo contas de sílica, armazenadas em baixa temperatura para preservar seu estado metabólico.

Homogeneize as bactérias em condições frias para liberar o conteúdo intracelular, minimizando a degradação enzimática dos metabólitos.

Centrifuge o lisado e colha o supernadante rico em metabólitos.

Adicione um solvente orgânico ao extrato e ao vórtice para precipitar macromoléculas a partir de metabólitos solúveis.

Centrifuge para pelletar o precipitado e transferir o sobrenadante para frascos.

Carregue os frascos em um sistema de cromatografia líquida-espectrometria de massas.

Dentro da coluna de cromatografia, os metabólitos interagem com a fase sólida estacionária com base em suas propriedades químicas.

Adicione um tampão para eluir os metabólitos. Em seguida, direcione os metabólitos para a fonte de ionização por eletrospray do espectrômetro de massa para ionizá-los.

Os íons são então separados com base em suas razões massa-carga.

Os dados resultantes são comparados a um banco de dados de referência para identificar os metabólitos.

Para iniciar a extração do metabólito, primeiro descongele as amostras em gelo úmido. Depois,