JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:51 min • November 28th, 2025
Veja a cultura de uma bactéria geneticamente modificada projetada para abrigar um plasmídeo que expressa uma proteína fluorescente secretora e confere resistência a antibióticos.
Inocule-o em um meio contendo o antibiótico e incube com agitação para promover o crescimento bacteriano.
O antibiótico garante que apenas as células que retêm o plasmídeo possam proliferar.
Quando a cultura atingir a densidade desejada, transfira-a para um sistema automatizado de manuseio de líquidos.
Uma placa de poço profundo contém diferentes concentrações de nutrientes essenciais, que são dispensados em uma placa de microtitulação para criar formulações de meio distintas.
Inocule cada poço da placa com a cultura bacteriana.
Sele a placa e coloque-a em um microbiorator, que mantém temperatura e aeração uniformes.
As diferentes formulações levam a variações no crescimento bacteriano e na secreção de proteínas fluorescentes.
Um sensor óptico no dispositivo mede a densidade e a fluorescência celular, permitindo a comparação entre o crescimento bacteriano e a produção de proteínas fluorescentes entre as formulações do meio.
Esterilize placas de poço profundo para armazenamento em solução de estoque em uma mesa de trabalho, limpando as placas com 70% de etanol e, posteriormente, secando-as em uma capela de fluxo laminar. Inicie a cultura de sementes inoculando 50 mililitros de meio BHI contendo 25 miligramas por litro de kanamicina com uma alíquota do banco de células de trabalho. Coloque todo o material de laboratório necessário na mesa de trabalho robótica e despeje as soluções de estoque nos equipamentos correspondentes.
Depois, inicie o fluxo robótico de trabalho para a preparação do meio, de modo que a última etapa, que é a inoculação, seja alcançada a tempo do início da cultura das sementes. Amostre a cultura de sementes após aproximadamente duas horas para monitorar o crescimento medindo a densidade óptica em 600 nanômetros ou OD600. Continue monitorando o crescimento a cada hora.
Após aproximadamente cinco horas, a cultura atinge um OD600 entre três e quatro, sendo usada para inocular as culturas principais. Coloque a cultura de sementes sobre a mesa de trabalho do manuseador de líquidos e continue o protocolo de preparação do meio. Sele as placas de microtítulo de cultivo após a inoculação.
Em seguida, coloque o MTP de cultivo selado no dispositivo Biolector. Depois, inicie o protocolo de cultivo pré-definido.