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Microbiologia
0 vistas • 2:35 min • November 28th, 2025
Comece inoculando um laço de uma cepa cianobacteriana em um meio de crescimento. Incube para permitir que as células cresçam até a densidade desejada.
Lave as células por centrifugação e descarte o sobrenadante contendo metabólitos residuais e detritos.
Resuspenda o pellet em um pequeno volume de meio de crescimento para criar uma suspensão concentrada.
Misture uma aliquota dessa suspensão com glicerol, um crioprotetor que estabiliza a membrana e previne a formação de cristais de gelo durante o congelamento.
A outra alíquota, adicione o dimetil sulfóxido, um crioprotetor que penetra nas células e inibe a nucleação do gelo.
Armazene as amostras em baixas temperaturas, onde a atividade metabólica para e as células permanecem viáveis por períodos prolongados.
Para reviver, raspe uma pequena quantidade da biomassa congelada em uma placa de ágar sem antibióticos e faça streak para reduzir o estresse e apoiar a recuperação gradual.
Esse método possibilita a criopreservação e o renascimento a longo prazo de cepas cianobacterianas para estudos futuros.
Para armazenar as cepas a longo prazo, instale uma nova cultura da cepa inoculando um laço cheio de células em 30 a 50 mililitros de meio BG11. Cultive a cultura por três a quatro dias para um OD750 igual a 0,4 a 0,7.
Após usar BG11 para lavar as células uma vez, ressuspenda o pellet em aproximadamente dois mililitros de BG11. Adicione 0,8 mililitros das células concentradas em um único tubo. Depois, adicione 0,2 mililitros de glicerol esterilizado com filtro 80%.
Em outro tubo, adicione 0,93 mililitros de células concentradas e 0,07 mililitros de DMSO. Armazene ambos os tubos a menos 80 graus Celsius. Para reviver as cepas, remova o tubo e use um palito de dente com extremidade romba para raspar algumas células em uma placa de ágar sem antibióticos. Depois use um laço estéril para sair normalmente como sempre.