Localização Bacteriana e Interação do Hospedeiro em Tecido Pulmonar Humano por Imagem

Veja uma suspensão de Staphylococcus aureus marcada com fluorescência e tecido pulmonar alveolar humano infectado pelas mesmas bactérias marcadas fluorescente.

Insira a ponta distal da sonda de microscopia de fluorescência confocal fibrada na suspensão bacteriana e escaneie.

Sinais fluorescentes brilhantes confirmam a marcação da membrana bacteriana e a ativação bem-sucedida da sonda

Registre a fluorescência conforme a sonda passa pela suspensão.

Usando um tecido limpador de lente embebido em peróxido de hidrogênio, limpe a sonda para remover bactérias residuais e evitar a fluorescência de fundo

Coloque a sonda limpa em contato direto com o tecido e escaneie a superfície.

No tecido, fibras de colágeno e elastina aparecem como uma matriz autofluorescente, enquanto bactérias marcadas fluorescente são visíveis como pontos brilhantes distintos.

Os espaços alveolares, sem fluorescência, aparecem como regiões escuras.

Grave um vídeo para capturar tanto bactérias aderidas ao tecido quanto bactérias frouxamente associadas, permitindo visualização em tempo real da infecção bacteriana no tecido alveolar pulmonar do hospedeiro.

Para iniciar a coleta de dados, clique em iniciar na tela ou pressione o pedal do pé esquerdo para ligar o laser. Em seguida, fotografe cada uma das amostras de suspensão bacteriana. Insira a extremidade distal da fibra de imagem FCFM e mova a fibra lentamente pela suspensão para analisar a amostra.

Grave vídeos de qualquer duração pressionando o pedal direito ou selecionando os controles de gravação na tela enquanto a fibra se move lentamente ao redor da amostra. Limpe a extremidade distal da fibra de imagem FCFM com peróxido de hidrogênio a 8% e tecidos de limpeza de lentes entre as amostras. Para obter imagens de cada amostra de tecido pulmonar, insira a extremidade distal da fibra de imagem FCFM na amostra, garantindo que haja contato direto entre a extremidade da fibra e o tecido.

Depois, mova suavemente a extremidade da fibra de imagem para analisar a amostra. Levantar a extremidade da fibra para longe do tecido remove o tecido do plano focal. No entanto, isso pode ser usado para imagear bactérias marcadas que não estão aderidas ao tecido.

Grave vídeos de qualquer duração pressionando o pedal direito ou selecionando os controles de gravação na tela enquanto a fibra se move lentamente ao redor da amostra.