Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:04 min. • January 30th, 2026
Comece com uma cultura de Legionella pneumophila, uma bactéria patogênica Gram-negativa que libera vesículas da membrana externa.
Esses OMVs carregam lipopolissacarídeos e proteínas membranares que contribuem para a virulência bacteriana.
Centrifuge a cultura para pelletar bactérias intactas.
Colete os OMVs que contenham o sobrenadante e centrifuge novamente para pelletar as bactérias residuais.
Filtre o sobrenadante através de uma membrana para remover as bactérias restantes enquanto retém os OMVs.
Realize uma segunda filtragem usando uma membrana nova para remover detritos bacterianos.
Colete o filtrado livre de bactérias e ultracentrífuge para pelletar os OMVs.
Descarte o sobrenadante, ressuspenda o pellet em um tampão e faça a ultracentrífuga novamente para remover proteínas e lipopolissacarídeos frouxamente associados.
Remova o sobrenadante e resuspenda os OMVs purificados em buffer.
Estrie uma alíquota dos OMVs em ágar sanguíneo e placas de ágar BCYE e incube.
A ausência de formação de colônias confirma a ausência de contaminação bacteriana.
Armazene os OMVs em baixa temperatura para estudos de interação hospedeiro-patógeno.
Adicione a cultura líquida restante a 90 mililitros de meio YEB
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