Isolamento de Células Epiteliais da Bexiga de Camundongo Contendo Comunidades Bacterianas Intracelulares

Comece com células epiteliais da bexiga raspadas de uma bexiga de camundongo infectada com E. coli uropatogênico marcado fluorescente.

Durante a infecção, essas bactérias invadem as células epiteliais e formam comunidades bacterianas intracelulares, ou IBCs — estruturas semelhantes a biofilmes que as protegem das defesas imunes do hospedeiro.

Sob um microscópio dissecante, identifique os IBCs como grandes agregados fluorescentes confinados dentro de células epiteliais individuais.

Montar um sistema de micropipetamento bucal usando um capilar de vidro puxado conectado a uma pipeta aspiradora para isolar células epiteliais individuais contendo IBC.

Mergulhe brevemente a ponta capilar em PBS para reduzir a absorção de fluido direcionada pelos capilares.

Posicione o capilar próximo à célula epitelial fluorescente selecionada e aplique uma sucção suave para atrair uma única célula contendo IBC, evitando células não infectadas e bactérias extracelulares.

Expulse a célula para um tubo estéril de microcentrífuga usando uma leve pressão positiva, preservando a viabilidade bacteriana.

Esse método permite o isolamento de células epiteliais que abrigam IBCs para análise de célula única.

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