Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 4:02 min. • February 2nd, 2026
Veja RNA total extraído de um cérebro de camundongo infectado por bactérias patogênicas. O extrato contém transcritos de genes responsivos à infecção.
Adicione uma enzima que degrade o DNA e incube para degradar o DNA genômico residual.
Adicione uma mistura mestre contendo a enzima transcriptase reversa (RT), nucleotídeos e primers inespecíficos.
Incubar para sintetizar DNA complementar (cDNA).
Introduza uma temperatura alta para inativar a enzima RT.
Pegue uma mistura mestre contendo DNA polimerase, nucleotídeos, um corante de dupla fita que liga o DNA e primers específicos para um gene alvo.
Adicione o cDNA e aplique calor para desnaturalizar o DNA.
O primer se liga ao cDNA alvo, permitindo a síntese de novas fitas de DNA.
O ciclo é repetido para amplificar o gene alvo.
O corante se liga ao DNA amplificado e emite fluorescência, que é registrada ao final de cada ciclo.
O aumento da fluorescência confirma a expressão do gene responsivo à infecção no cérebro do camundongo infectado.
Infecte todos os camundongos usando células planctônicas ou células do estado de biofilme e realize a eutanásia conforme descrito no protocolo de texto. Em seguida, extraia o RNA total do tecido cerebral usando um
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