JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:55 min • February 2nd, 2026
Comece com um estoque congelado de Mycobacterium tuberculosis, uma bactéria patogênica que causa tuberculose pulmonar.
Descongele o frasco e misture suavemente a suspensão para dispersar os aglomerados bacterianos e garantir uma concentração uniforme.
Dilua o volume necessário em um tampão estéril para preparar um inóculo de aerossol padronizado.
Prenda o rato em um suporte de malha para limitar o movimento e coloque-o dentro da câmara de exposição ao aerossol selada.
Coloque o inoculo preparado em uma seringa e injete-o na unidade nebulizadora acoplada à câmara.
Ative o sistema de inalação, que usa ar comprimido para nebulizar a suspensão em gotículas finas e respiráveis.
Essas gotas, contendo M. tuberculosis viável, se dispersam no ar da câmara.
O camundongo consciente inala o aerossol, permitindo que bactérias viáveis penetrem profundamente nos pulmões e iniciem a infecção.
O modelo murino da tuberculose pulmonar está agora pronto para estudos adicionais.
Comece aquecendo estoques de Mycobacterium tuberculosis de um título conhecido de CFU. Quando as células descongelarem, use uma seringa de 1 mililitro equipada com uma agulha calibre 27 para misturar cuidadosamente a suspensão cinco vezes e dispersar os aglomerados bacterianos, evitando a produção de aerossóis. Dependendo da dose desejada para infecção, transfira o volume necessário do estoque micobacteriano para um tubo de 50 mililitros contendo PBS estéril para um volume final de 6 mililitros. Em seguida, coloque os animais experimentais individualmente em cestos de malha compartimentados. Coloque os cestos na câmara circular de aerossol e feche a tampa da câmara.
Conecte a unidade nebulizadora Venturi às três juntas de soquete de aço inoxidável. Aspire a suspensão micobacteriana em uma seringa de 10 mililitros, equipada com uma agulha romba calibre 18, e leve a seringa até a câmara de aerossol em uma caixa de transporte fechada. Agora remova a tampa do rosqueo do nebulizador e injete cuidadosamente a suspensão de micobactérias na unidade, tomando cuidado para evitar a geração de aerossóis.
Descarte a seringa em um recipiente de objetos cortantes contendo 2% de Buraton e então fele o nebulizador.
Ligue o aparelho de inalação.
Quando o ciclo estiver completo, confirme que a suspensão de micobactérias foi completamente nebulizada.