Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:40 min. • February 2nd, 2026
Comece com uma lâmina contendo um mosquito adulto anestesiado em uma gota de soro salino ou PBS tamponado com fosfato.
Sob um microscópio dissecador, remova as pernas, asas e cabeça do mosquito.
Corte a ponta do abdômen para evitar danificar o trato digestivo.
Prenda o tórax e a extremidade do abdômen, depois puxe suavemente o trato digestivo para extraí-lo.
O trato digestivo extraído inclui o intestino médio, responsável pela digestão e abriga diversas bactérias intestinais que influenciam a fisiologia dos mosquitos.
Sob ampliação maior, remova cuidadosamente as estruturas ao redor para isolar o intestino médio.
Transfira o intestino médio isolado para um tubo novo contendo PBS.
Homogeneize o intestino médio para liberar as bactérias no PBS.
Espalhe o homogenado diluído sobre uma placa de ágar nutritivo.
Incube a placa para permitir o crescimento das colônias bacterianas, representando a flora microbiana do intestino médio do mosquito.
Dissece o mosquito separadamente em uma lâmina de vidro estéril contendo uma gota de PBS. Remova cuidadosamente as pernas, asas e cabeça do mosquito usando uma pinça.
Prenda o peito do mosquito e a última seção do abdômen com uma pinça e separe para isolar o trato digestivo.
Use pinças para remover a colheita e o tubo de Malpighi do trato digestivo. A cultura é posicionada na parte anterior do intestino médio e protubera após ingerir água com açúcar. Os tubos de Malpighi são um grupo de tubos excretores finos na junção do intestino médio e do intestino posterior.
Coloque o intestino médio dissecado em um tubo EP com 200 microlitros de PBS estéril e moa com o pilão estéril na bancada super limpa. Dilua em série o homogenado em três diluições de 10 vezes a 50 microlitros de cada diluição até a placa de ágar LB e então espalhe a placa.
Incube a placa a 37 graus por um a dois dias até que colônias individuais estejam visíveis.