Imagens ao vivo da morte celular de macrófagos durante infecção por micobactérias em embriões de peixe-zebra

Comece com embriões transgênicos de peixe-zebra expressando macrófagos marcados fluorescente, montados em agarose de baixa fusão em uma placa de imagem.

Esses embriões são infectados com Mycobacterium marinum marcado fluorescentemente por microinjeção intramuscular no mesencéfalo, iniciando uma resposta imune localizada.

Cubra a agarose solidificada com meio embrionário contendo anestésicos para manter a anestesia e inibidores químicos para suprimir a pigmentação, garantindo clareza óptica para exames de imagem.

Coloque o prato na câmara ambiental de um microscópio confocal de alta resolução.

Usando iluminação em campo claro, localize a região infectada.

Ative os canais de laser de fluorescência, defina as posições inicial e final da pilha Z e inicie a imagem em time-lapse.

Visualize o macrófago infectado, cheio de bactérias fluorescentes, enquanto ele se torna arredondado e imóvel.

Isso indica degradação do citoesqueleto e início da morte das células líticas.

Com o tempo, o macrófago incha e rompe, liberando conteúdos citoplasmáticos e bactérias internalizadas no tecido ao redor, um sinal característico da morte inflamatória das células líticas.

Quando a agarose estiver completamente solid