Modelagem da Infecção em Camundongos Neonatais Usando Bactérias Bioluminescentes Encapsuladas

Comece com filhotes de camundongos neonatos com idade correspondente.

Levante delicadamente a pele na parte de trás do pescoço de cada filhote. Injete subcutaneamente um filhote com uma suspensão de baixa concentração de bactérias patogênicas e outro com uma suspensão de alta concentração.

Essas bactérias expressam um operon bioluminescente que produz a enzima luciferase e seu substrato, permitindo a emissão autônoma de luz.

Uma cápsula protetora de polissacarídeos envolve as bactérias e mascara seus antígenos de superfície, impedindo o reconhecimento pelas células imunes dos filhotes.

Devolva os filhotes à mãe biológica para cuidados pós-natais.

A proliferação bacteriana no local da injeção desencadeia inflamação e aumento da permeabilidade vascular, permitindo a entrada bacteriana na corrente sanguínea e a disseminação sistêmica.

Coloque os filhotes anestesiados sob um sistema de imagem por luminescência.

A luciferase oxida o substrato para produzir luz visível, permitindo a visualização das bactérias dentro dos filhotes.

Capture imagens ao longo do tempo para comparar o crescimento e a disseminação bacteriana em filhotes inoculados com concentrações bacterianas altas e baixas.

Comece colocando filhotes com idade semelhante em grupos de ninhada de alta ou baixa dose dentro de um armário de biossegurança nível dois. No dia pós-natal 3 ou 4, registre o peso de todos os filhotes antes da inoculação.

Coloque as seringas de insulina com PBS ou com doses altas ou baixas de E. Inoculum Coli Lux no armário de biossegurança e coloque as seringas carregadas no gelo.

Coloque o recém-nascido para ser injetado em uma superfície limpa dentro do armário de biossegurança e eleve a pele na nuca como se fosse abraçar o filhote. Insira o bisel da agulha logo abaixo da pele, no espaço criado entre a pele e o músculo. Quando a agulha puder ser sentida sob a pele, injete 50 microlitros do inoculante enquanto simultaneamente libera a parte comprimida da pele para evitar o refluxo. Depois, remova a agulha devagar e com cuidado.

Quando todos os filhotes forem injetados da mesma forma, devolva-os às mães. Imediatamente após a injeção e nos momentos experimentais apropriados, coloque a gaiola com E. camundongos neonatais infectados com coli lux e DAM em um capuz de fluxo laminar de nível dois de biossegurança e abrem o software no microcomputador de tomografia computadorizada. Após inicializar o sistema e esperar que a temperatura do estágio trave em 37 graus Celsius e a temperatura CCD trave em -90 graus Celsius, coloque até quatro PUPs anestesiados na caixa de imagem na câmara de imagem, em posição prona.

Feche a porta da câmara de imagem e selecione a opção de imagem luminescente. Selecione filtro aberto e próximo, e configure o filtro de excitação para bloquear e o filtro de emissão para aberto. Selecione 500, 520, 560, 580, 600 e 620 nanômetros.

Depois, faça uma imagem dos filhotes antes de devolvê-los à gaiola com a mãe, monitorando até a recuperação da anestesia.