Visualização da Infecção do Trato Urinário em um modelo de camundongo usando bioluminescência

Comece com um camundongo anestesiado e, usando um cateter, injete uma suspensão de bactérias patogênicas na bexiga urinária.

Essas bactérias carregam um operon bioluminescente, que permite a produção autônoma de luz para rastrear a infecção.

O revestimento interno da bexiga é um epitélio especializado que separa o lúmen do tecido subjacente.

As proteínas de adesão bacteriana se ligam aos receptores de glicoproteína na superfície epitelial do hospedeiro, desencadeando endocitose mediada pelo receptor.

As bactérias internalizadas se replicam para formar densas comunidades bacterianas intracelulares.

As bactérias expressam o operon bioluminescente, produzindo uma enzima luciferase e um complexo enzimático que sintetiza o substrato da luciferase.

A luciferase oxida o substrato para emitir luz visível.

Posicione o rato dentro da câmara de imagem e capture o sinal bioluminescente.

Selecione uma região de interesse e quantifique a intensidade da bioluminescência.

Monitore esse sinal ao longo do tempo como um indicador em tempo real da carga bacteriana e da progressão da infecção.

Abra o software de aquisição BLI e clique em Inicializar no dispositivo de imagem para testar a câmera e o sistema controlador de palco e resfriar a câmera do dispositivo acoplado a carga acoplada a menos 90 graus Celsius. Clique em Aquisição, Salve Automaticamente Para. Selecione Luminescência e fotografe. Verifique as configurações luminescentes padrão definindo o filtro de excitação para Bloqueio e o filtro de emissão para Aberto.

Configure o tempo de exposição para automático ao tirar a primeira imagem. Para medições in vivo e sinais brilhantes, defina o tempo de exposição para cerca de 30 segundos. Reduza o tempo de exposição se aparecer um aviso devido à imagem saturada.

Selecione o binning médio, o F/stop um, e escolha o FOV correto. Defina a altura do sujeito para 1 centímetro ao fotografar camundongos. Fotografe até 5 camundongos simultaneamente e separe os animais usando o defletor de luz para evitar reflexos.

Feche a porta e clique em Adquirir para iniciar a sequência de imagem. Depois, preencha informações detalhadas sobre o experimento. Retire os camundongos da câmara de imagem e os coloque de volta na gaiola. Verifique se há recuperação total após a anestesia. Depois, devolve as gaiolas aos suportes ventilados até o próximo ciclo de imagem.

Inicie o software de imagem e carregue o arquivo experimental clicando em Navegar. Use a paleta de ferramentas para ajustar a escala de cores da imagem. Use as ferramentas de ROI para desenhar uma região de interesse na imagem, garantindo que ela seja grande o suficiente para cobrir toda a área e usando as mesmas dimensões para todas as imagens. Depois, clique em medição de ROI para quantificar a intensidade da luz.