Injeção intraperitoneal de lipopolissacarídeo bacteriano em camundongos para estudar respostas imunes sistêmicas

Comece com um rato acordado, contido para limitar seu movimento.

Incline a cabeça para baixo para expor a parte inferior do abdômen.

Localize a linha média abdominal e identifique um local de injeção ligeiramente descentrado para evitar órgãos internos.

Em seguida, pegue uma seringa contendo uma solução de lipopolissacarídeos, um componente do envelope celular bacteriano Gram-negativo.

Insira a agulha no local para acessar a cavidade peritoneal e injete a solução.

Uma vez injetado, o LPS entra na circulação sistêmica e desencadeia uma resposta imunológica.

Na corrente sanguínea, o LPS se liga à proteína que se liga ao LPS, que a transfere para CD14, uma proteína de membrana das células imunológicas.

O CD14 entrega LPS para MD-2, uma glicoproteína que se associa ao receptor tipo Toll 4 (TLR4), possibilitando a dimerização TLR4.

O TLR4 dimerizado recruta proteínas adaptadoras que ativam vias de sinalização a jusante, induzindo expressão de citocinas pro-inflamatórias e inflamação sistêmica.

Ele modela a translocação microbiana e a ativação imunológica sistêmica nos intestinos e outros órgãos causada por produtos bacterianos.

Manuseie o rato com delicadeza, mas firmeza, e prenda o animal com uma mão. Certifique-se de que o rato esteja segurado com segurança e possa respirar normalmente.

Incline levemente o nariz do rato para o chão para expor o abdômen para injeção. Localize a linha média do abdômen e injete o volume de LPS necessário na parte inferior esquerda ou direita.

É muito importante garantir que a agulha entre na cavidade peritoneal para evitar injeções erradas.

A agulha também não deve penetrar muito fundo na cavidade peritoneal para evitar lesões nos órgãos internos.

Devolva o animal suavemente à gaiola de casa.

Monitore os camundongos para detectar a ocorrência e gravidade da endotoxemia no momento da injeção e a cada 2 horas depois disso por 8 horas. Registre as observações na folha de pontuação anexada.